一文與您分享通用PCR試劑盒的樣品制備方法
點擊次數(shù)：892 更新時間：2022-06-17
通用PCR試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品，含有TaqDNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR增強劑、上樣染料等所有PCR所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進行PCR反應(yīng)，具有廣泛的用途。
今天小編要與大家分享的是通用PCR試劑盒的樣品制備方法：
1.用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。。也可以選購本公司的一管式病毒DNAout或其升級版柱式病毒DNAout。本試劑盒免費贈送15次DNA病毒裂解液試用裝。稀釋陽性對照（以10E2-10E7這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的長為86bp的DNA的片段作為陽性對照。
2.標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3.用帶芯槍頭分別加入45μL模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4.在7號管中加入5μL1×10E8拷貝/μL的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5.換槍頭，在6號管中加入5μL1×10E7拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭，在5號管中加入5μL1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭，在4號管中加5μL1×10E5拷貝/μL的陽性對照到4號管中，得1×10E4拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
8.重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設(shè)置qPCR反應(yīng)（20μL體系，在樣品制備室進行）
9.在PCR管中加入下列成分。（待測樣品需要做三次重復(fù)，下表只列出一次。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加。）
