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ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡(jiǎn)稱(chēng)。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫酶技術(shù)。
ELISA的檢測(cè)目的是為了實(shí)驗(yàn)提供準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為了保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中必須堅(jiān)持全面的質(zhì)量控制和全過(guò)程質(zhì)量控制，在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃。
ELISA標(biāo)本的處理：
1、血清：室溫血液私人凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，如有沉淀形成，應(yīng)再次離心
3.尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成分時(shí)，用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）仔細(xì)收集上清，檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成分時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右，通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成分。
5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量，加入一定量的PBS，PH7.4，用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆茫瑯?biāo)本融化后任然保持2-8°C的溫度，加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用，
6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行試驗(yàn)，若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20°C保存，單應(yīng)避免反復(fù)凍融。
在檢測(cè)時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗原）與固相載體表面的抗體反應(yīng)。洗滌后加入酶標(biāo)記的抗體，通過(guò)反應(yīng)結(jié)合在固相載體上。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
注意事項(xiàng)：
1、每個(gè)樣本量收集體積=100ulx檢測(cè)種類(lèi)，如果要做復(fù)孔，標(biāo)本量收集體積=100ulx檢測(cè)種類(lèi)x2
2、樣本收集后若在一周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)可保存于2-8°C，若不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)進(jìn)行分裝，凍存于-20°或-80°C，避免反復(fù)凍融
3、試劑盒的檢測(cè)范圍不等同于樣本中待測(cè)物的濃度范圍，建議實(shí)驗(yàn)前通過(guò)相關(guān)文獻(xiàn)預(yù)估樣本中待測(cè)物的濃度并通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定樣本。
4、血清標(biāo)本采集是應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解是會(huì)釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì)，溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色
5、為了保證尿液檢測(cè)的準(zhǔn)確性，必須正確收集尿液標(biāo)本和保存，收集尿液的容器必須要清潔干燥，最好使用一次性的容器，避免因用藥并清潔不到而造成的污染，尿液樣本必須新鮮，留取后，應(yīng)及時(shí)檢測(cè)或保存
6、標(biāo)本宜在新鮮是檢測(cè)如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。如在冰箱中保存過(guò)久，其中可能發(fā)生聚合，間接法ELISA中樂(lè)視本底加深，
7、反復(fù)凍融會(huì)使蛋白效價(jià)降低，所以待測(cè)樣本如需多次檢測(cè)，宜少量分裝凍存。
